激光显微镜的组成、使用领域及优点

激光显微镜的组成、使用领域及优点说明

激光光学显微镜主要组成：

（1）物镜物镜是决定显微镜性能的最重要部件，安装在物镜转换器上，接近被观察的物体，故叫做物镜或接物镜。物镜的放大倍数与其长度成正比。物镜放大倍数越大，物镜越长。

（2）目镜因为它靠近观察者的眼睛，因此也叫接目镜。安装在镜筒的上端。

（3）聚光器：聚光器也叫集光器。位于标本下方的聚光器支架上。它主要由聚光镜和可变光阑组成。其中，聚光镜可分为明视场聚光镜（普通显微镜配置）和暗视场聚光镜。

（4）反光镜：反光镜是一个可以随意转动的双面镜，直径为50mm，一面为平面，一面为凹面，其作用是将从任何方向射来的光线经通光孔反射上来。平面镜反射光线的能力较弱，是在光线较强时使用，凹面镜反射光线的能力较强，是在光线较弱时使用。

（5）照明光源：显微镜的照明可以用天然光源或人工光源

（6）滤光器：安装在光源和聚光器之间。作用是让所选择的某一波段的光线通过，而吸收掉其他的光线，即为了改变光线的光谱成分或削弱光的强度。分为两大类：滤光片和液体滤光器。

（7）盖玻片和载玻片：盖玻片和载玻片的表面应相当平坦，无气泡，无划痕。最好选用无色，透明度好的，使用前应洗净。盖玻片的标准厚度是0.17±0.02mm，如不用盖玻片或盖玻片厚度不合适，都会影响成像质量。载玻片的标准厚度是1.1±0.04mm，一般可用范围是1—1.2mm，若太厚会影响聚光器效能，太薄则容易破裂。

激光显微镜的使用领域

（1）共聚焦及双光子在现代生物学研究中有如下应用：

（2）多色荧光成像(Multi-color imaging)，具有多磁道和双向扫描，曲线扫描等特性。

（3）三维重构（Three dimentional reconstruction）及定量分析。

（4）实时成像（Time series,real time imaging），可进行活细胞跟踪。

（5）离子成像（Ion imaging）/比率成像（Ratio imaging），可进行Ca2+,Mg2+,H+,Na+,K+,Zn2+,Ni2+,Fe2+,Hg2+,Pb2+及Cd2+等成像。

（6）荧光原位杂交（FISH:fluorescence in situ hybridization）；

（7）荧光漂白恢复（FRAP：fluorescence recovery after photobleaching）；

（8）荧光共振能量转移（FRETM:fluorescence resonance energy transfer；

（9）光生命期成像显微术（FLIM:fluorescence lifetime imaging microscopy）。

（10）荧光相关光谱（FCS:fluorescence correlation spectroscopy）。

激光显微镜的优点

（1）荧光标记的特异性及可定量性。

（2）共聚焦针孔的运用，有效的消除了焦平面上下散射光，提高轴向分辨率。

（3）点光源激光的应用，对荧光素能达到有效的激发，激发的特异性高，降低对荧光的淬灭，增强侧向分辨率。

（4）双光子的应用，相对较低平均功率的红外激发，大大减低对活细胞的损伤；荧光激发高度聚焦在焦点处，可避免了焦点以外的光漂白（Photobleaching）和光毒（cytotoxicity）作用，延长观察时间，是目前用于活细胞跟踪的最理想方法。

（5）脉冲激光散射和吸收程度小，透射性强，对厚样品的穿透可达400um，是对厚的组织分析的最首先方法。

（6）结合META新技术，尤其对荧光蛋白成像具有更方便，更精确的效果。